HE-天青II雙染法在骨髓穿刺活檢石蠟切片染色中的應用

HE-天青II雙染法在骨髓穿刺活檢石蠟切片染色中的應用

王華 夏朝霞 施婧婧

寧波市臨床病理診斷中心 

[摘要] 目的：探索一種操作簡便，能夠更為清晰的顯示骨髓穿刺石蠟組織切片中不同發育階段的三系細胞的染色方法。方法：選取120例骨髓病理活檢石蠟包埋組織，分別行HE染色和天青II-HE染色,對骨髓切片中各系細胞染色的效果進行判讀，比較和評價HE-天青II雙染法與常規HE染色在骨髓穿刺石蠟組織切片的染色效果。結果：天青II-HE染色法比HE染色更加清晰的顯示出骨髓穿刺石蠟組織切片中不同發育階段的紅系、粒系、巨核系骨髓細胞的胞漿嗜堿性。天青II-HE染色法可以顯示出HE染色不能顯示的嗜堿性粒細胞。結論： 在骨髓穿刺石蠟組織切片染色中，天青II-HE染色法操作簡便，可以作為骨髓活檢常規HE染色的補充，為骨髓活檢病理診斷提供更多技術手段。

[關鍵詞]骨髓穿刺，病理活檢，石蠟切片；HE染色；HE-天青II染色；

骨髓病理學診斷即骨髓活組織診斷（bone marrow biopsy,BMB），簡稱骨髓活檢，以病理組織切片為標本，進行的骨髓組織（造血組織和細胞）形態學檢驗和分析評估^【1】。優良的骨髓穿刺活檢石蠟切片染色技術是骨髓活檢病理診斷的基礎，也是病理技術工作中的難點。傳統常規HE染色方法是骨髓穿刺活檢的基礎染色方法，但HE染色在顯示不同分化發育階段的紅系、粒系骨髓細胞胞漿的嗜堿性差異和嗜堿性粒細胞的嗜堿性顆粒等方面都不理想。探索一種新的染色方法，能有效的顯示不同種類及不同發育階段的骨髓細胞的形態特點，將對骨髓穿刺活檢病理診斷的準確性提供有效的幫助。

1 材料和方法

1.1 材料選擇寧波市臨床病理診斷中心骨髓穿刺活檢石蠟包埋標本120例。

1.2主要儀器 ThermoMICROMHm325切片機。

1.3試劑 GS環保HE染色套裝，天青II染液。

2 方法

2.1 骨髓活檢組織前處理骨髓穿刺組織經中性緩沖福爾馬林固定12小時骨髓脫鈣液脫鈣后，常規脫水、包埋。

2.2切片 骨髓穿刺活檢石蠟包埋組織切片厚度2μm，連續切片2張。

2.3 HE染色 采用GS環保HE染色套裝進行手工染色。

2.4 HE-天青II染色 根據骨髓HE切片的情況選擇含三系骨髓細胞超過40%骨髓穿刺活檢組織切片進行HE-天青II雙染。染色步驟：①GS環保脫蠟劑切片脫蠟至水，②蘇木素染色5min，③水洗1min,④0.1%鹽酸乙醇分化至細胞核清晰胞漿無明顯蘇木素非特異性染色，⑤飽和碳酸鋰水溶液返蘭3s，自來水洗5min，⑥天青II染液浸染5min，蒸餾水洗5min，⑦0.01%醇溶性伊紅浸染5min⑧梯度酒精脫水，⑨GS環保透明劑透明，⑩環保封片膠封片

3結果

骨髓穿刺組織HE切片120例，其中含三系骨髓細胞超過40%的病例78張進行HE-天青II染色。HE-天青II染色切片中各系骨髓細胞形態完整，核膜核仁清晰，核漿對比清晰，不同發育階段的紅系、粒系、巨核系胞漿嗜堿性差異明顯，粒系細胞胞漿的嗜酸性顆粒、嗜堿顆粒清晰，對比明顯 （圖A、B）。78例HE-天青II染色切片中觀察到嗜堿性粒細胞的5例（6.4%）。相同病例對應的HE染色各系骨髓細胞形態完整，核膜核仁清晰，核漿對比清晰，嗜酸性粒細胞胞漿顆粒清晰，但胞漿嗜堿性弱，不同發育階段的骨髓細胞胞漿嗜堿性差異不明顯。78例HE染色切片中觀察到嗜堿性粒細胞的0例（0%）。其中一例骨髓HE-天青II染色切片中局部顯示有較多嗜堿性粒細胞，在HE染色切片相同區域中未觀察到嗜堿性粒細胞的存在，與嗜堿性粒細胞形態特點相似的細胞胞漿顆粒顯示具有嗜酸性（圖C、D）。

4 討論

骨髓活檢石蠟包埋切片染色技術的質量是準確進行骨髓病理診斷的基礎。骨髓細胞中的紅系、粒系、巨核系三系細胞越幼稚，胞質染色越深（嗜堿），細胞越成熟，染色越淺淡（嗜酸）；以胞漿染色深淺判斷有核紅細胞、粒細胞、和巨核細胞的成熟度^【2】。常規HE切片染色中紅系、粒系、巨核系不同發育階段的骨髓細胞胞漿嗜堿性差異小，不能區分嗜酸性顆粒與嗜堿性顆粒，造成骨髓病理診斷的困難。

 天青II染料系亞甲藍與天青I的等量混合物，而天青I主要由天青A、天青B的混合物，亞甲藍（C₁₆H₁₈ClN₃S·3H₂0），天青A(C₁₄H₁₄ClN₃S)、天青B（C₁₅H₁₆ClN₃S）三種染料均溶于水，水溶液中三種染料分子電離而帶正電，能夠與骨髓細胞胞漿中的嗜天青分子成分有特異的結合。不同發育階段的骨髓細胞胞漿中所含的嗜天青顆粒成分有明顯差異，天青II染料分子的對胞漿嗜堿性成分的結合使其呈現出不同程度的嗜堿性。使骨髓細胞中的不同發育階段的骨髓細胞更易于區分。天青II染料在水溶液中呈正電，染色過程中對組織與細胞中嗜伊紅的組織成分影響小，使用HE-天青II雙染法在HE染色的基礎上增加了天青II染液的染色特點，彌補了常規HE染色不能顯示的嗜天青成分，胞核紅藍對比更鮮明，處于不同發育階段的三系骨髓細胞胞漿嗜堿性有層次。HE-天青II雙染法操作簡便，是一種可以推廣的骨髓活檢石蠟組織切片染色新方法。 

參考文獻：

【1】盧興國.骨髓細胞學和病理學.北京：科學出版社，2008:3-5.

【2】陳輝樹.骨髓病理學.北京:人民軍醫出版社,2010:25-26

                                                圖A：病例一（HE-天青II染色）

                                                                 圖B：病例一（HE染色）

                                             圖C：病例二（HE-天青II染色）顯示嗜堿性粒細胞

   圖D：病例二（HE染色）在HE-天青II染色中胞漿嗜堿性顆粒在HE染色中顯示為嗜酸性

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